Использование по назначению Комплект EliGene® GIST NGS предназначен для мультиплексирования ПЦР целевых областей генов c-KIT (экзоны 9, 11, 13, 17) и PDGFR (экзоны 10, 12, 14, 18), что позволяет обнаруживать полиморфизмы, входящие в амплифицированные области. Принцип действия метода Комплекты EliGene® NGS позволяют мультиплексировать ПЦР-амплификацию всех необходимых целевых областей интересующего гена (генов). Рекомендуемое количество ДНК для каждой реакции мультиплексной ПЦР составляет от 20 до 100 нг ДНК, полученной из материала, содержащего формалин и парафин (FFPE), или из крови. Затем полученные ампликоны штрих-кодируются с МИД-последовательностями и смешиваются на каждый образец. Этот образец подвергается количественной оценке и секвенированию с помощью прибора NGS Illumina для массивно-параллельного секвенирования (МПС) в соответствии с инструкциями изготовителя. Полученные в результате считывания последовательности затем анализируются путем сравнения с референтной последовательностью целевого гена (генов) для определения вариантов положения. Введение Наборы EliGene® NGS используются для одной или нескольких мультиплексных ПЦР-реакций, приводящих к усилению целевых областей одного образца. Для амплификации используется готовая к использованию мастер-смесь, содержащая ДНК-полимеразу горячего запуска. Полученные ампликоны каждого мультиплекса разбавляют в 100 раз. На втором этапе выполняется второй раунд ПЦР с использованием комплекта EliGene® Adaptor-IL NGS, позволяющего маркировать все ампликоны MIDs и адаптерами p7 и p5, необходимыми для секвенирования Illumina MiSeq. Полученные ампликоны с метками смешиваются на индивидуальной основе с применением предопределенной схемы смешивания.